Molecular detection of Cercopithifilaria bainae and other tick-borne pathogens in Rhipicephalus sanguineus s.l. isolated from dogs in Midwest Brazil / Detecção molecular de Cercopithifilaria bainae e outros patógenos transmitidos por carrapatos em Rhipicephalus sanguineus s.l. isolados de cães no Centro-Oeste do Brasil

Abstract The aim of the present study was to detect Cercopithifilaria bainae and other tick-borne pathogens and to perform molecular characterization of the tick Rhipicephalus sanguineus s.l. collected from dogs. Ticks (n = 432, including 8 larvae, 59 nymphs, and 365 adults) were sampled from domiciled dogs (n = 73) living in Campo Grande, Mato Grosso do Sul (Midwest Brazil). All ticks were morphologically identified as R. sanguineus. Genomic DNA was extracted in pools (three to five ticks per animal) and was used for definition of R. sanguineus haplotypes (based on 16S rRNA analysis) and pathogen identification (Cercopithifilaria sp., Ehrlichia canis, Anaplasma platys, Hepatozoon canis, Babesia vogeli and Rickettsia spp.). Rhipicephal us sanguineus specimens were identified as haplotypes A and B. DNA of Cercopithifilaria bainae (43.83%; 32/73), Ehrlichia canis (24.65%; 18/73), Anaplasma platys (19.17%; 14/73), and Hepatozoon canis (5.47%; 4/73) was detected. The identity of pathogens was confirmed by DNA sequence analysis. The present study confirms the presence of haplotypes A and B of R. sanguineus in the state of Mato Grosso do Sul and its importance as a vector of several pathogens of veterinary concern. Finally, this is the first report to identify C. bainae in ticks in the Midwestern region of Brazil.

Resumo O objetivo do presente estudo foi detectar Cercopithifilaria bainae e outros patógenos transmitidos por carrapatos e realizar a caracterização molecular do carrapato Rhipicephalus sanguineus s.l. coletado em cães. Carrapatos (n = 432, incluindo 8 larvas, 59 ninfas e 365 adultos) foram amostrados de cães domiciliados (n = 73) residentes no município de Campo Grande, Mato Grosso do Sul (centro-oeste do Brasil). Todos os carrapatos foram identificados morfologicamente como R. sanguineus. O DNA genômico foi extraído em pools (três a cinco carrapatos por animal), seguido pela definição de haplótipos (com base no gene 16S rRNA) e pela investigação de patógenos (Cercopithifilaria sp., Ehrlichia canis, Anaplasma platys, Hepatozoon canis, Babesia vogeli e Rickettsia spp.). Os espécimes coletados foram identificados como haplótipos A e B de R. sanguineus. Foram detectados DNA de Cercopithifilaria bainae (43,83%; 32/73), Ehrlichia canis (24,65%; 18/73), Anaplasma platys (19,17%; 14/73) e Hepatozoon canis (5,47%; 4/73). A identidade dos patógenos foi confirmada por análise de sequência de DNA. O presente estudo confirma a circulação dos haplótipos A e B de R. sanguineus no estado de Mato Grosso do Sul e sua importância como vetor de vários patógenos de interesse veterinário. Finalmente, este é o primeiro relato de C. bainae em carrapatos na região centro-oeste do Brasil.

Rangelia vitalii and Hepatozoon canis coinfection in pampas fox Lycalopex gymnocercus from Santa Catarina State, Brazil / Infecção por Rangelia vitalii e Hepatozoon canis em Lycalopex gymnocercus proveniente do Estado de Santa Catarina, Brasil

Abstract Rangelia vitalii is a haemoparasite that infects erythrocytes, white blood cells and the cytoplasm of endothelial cells of blood capillaries of canids in South America, and has been detected in both domestic dogs and sylvatic canids. Hepatozoon canis is a parasite that infects neutrophils and monocytes of many mammalian hosts. This study reports the infection of Lycalopex gymnocercus from Santa Catarina, Brazil, with R. vitalii and H. canis. The piroplasm was observed on both blood smears and molecular tests. Many large piroplasms were detected inside the erythrocytes, with round, oval, or teardrop-shaped organism, that occurred singly or in pairs. They had an abundant, pale blue cytoplasm and decentral dark red small nucleus. The animal was also infected with H. canis that was detected only by molecular tests. The majority of haematological and biochemistry parameters were within the reference values for domestic dog and wild canids.

Resumo Rangelia vitalii é um hemoparasita que infecta eritrócitos, macrófagos e células endoteliais de canídeos na América do Sul, e vem sendo detectado tanto em cães domésticos quanto em canídeos silvestres. Hepatozoon canis é um parasita que infecta monócitos e neutrófilos de mamíferos. No presente estudo, é descrita a infecção de Lycalopex gymnocercus, proveniente de Santa Catarina, Brasil, por R. vitalii e H. canis. O piroplasma foi diagnosticado nos esfregaços sanguíneos e por técnicas moleculares. Nos eritrócitos foram observados vários merozoítos grandes, ovais, arredondados ou em forma de gota, ocorrendo isoladamente ou em pares. Estes piroplasmas apresentavam citoplasma abundante, corado em azul claro, com núcleo pequeno, avermelhado e descentralizado. O animal apresentou coinfecção com H. canis, que foi diagnosticado somente pelos testes moleculares. A maior parte dos parâmetros hematológicos e bioquímicos do animal estava dentro dos valores de referência para cães domésticos e canídeos silvestres.

Molecular diagnosis of Hepatozoon canis in symptomatic dogs in the city of Goiania, Goiás, Brazil / Diagnóstico molecular de Hepatozoon canis em cães sintomáticos do município de Goiânia, Goiás, Brasil

More than 300 species have been described in the genus Hepatozoon, occurring in different vertebrates. Among these, only Hepatozoon canis and Hepatozoon americanum are seen in dogs. Different methods may be used for laboratory diagnosis. The most common of these is direct parasitological examination of parasite stages in blood smears. The aim of this investigation was to conduct a phylogenetic study on Hepatozoon isolates from symptomatic dogs in the city of Goiânia, Goiás, Brazil. Blood samples were obtained from 40 symptomatic dogs that had been referred to the Veterinary Hospital of the Federal University of Goiás. Among these, only two samples were positive for Hepatozoon spp. using the direct parasitological method. These samples were then subjected to a DNA extraction process and amplification of a fragment of the 18S rRNA by means of PCR. Subsequently, the PCR products from each sample were purified and sequenced. The sequences obtained were then analyzed using the BLASTn algorithm, which identified both sequences of this study as Hepatozoon canis. By applying the Mega4 software, it was confirmed that these isolates of H. canis from dogs in Goiânia are similar to other reference isolates of the same species from other regions of Brazil and worldwide.(AU)

São descritas mais de 300 espécies do gênero Hepatozoon que acometem diferentes vertebrados. Entre estas, apenas Hepatozoon canis e Hepatozoon americanum são descritas em cães. Diferentes métodos podem ser utilizados para o diagnóstico laboratorial. O mais empregado é o exame parasitológico direto do parasito em esfregaços sanguíneos. O objetivo deste trabalho foi realizar um estudo filogenético em Hepatozoon isolados de cães sintomáticos de Goiânia, Goiás. As amostras de sangue foram obtidas de 40 cães sintomáticos encaminhados ao Hospital Veterinário da Universidade Federal de Goiás. Entre essas, duas únicas amostras foram positivas para Hepatozoon spp. pelo método parasitológico direto. Estas amostras foram, então, submetidas ao processo de extração de DNA e de amplificação de um fragmento de 18S rRNA por PCR. Ambas as amostras foram positivas na PCR. Posteriormente, os produtos de PCR de cada amostra foram purificados e sequenciados. As sequências obtidas foram analisadas pelo algoritmo BLASTn, sendo identificadas como Hepatozoon canis. Por meio do software Mega4 foi confirmado que estes isolados de H. canis de cães de Goiânia são semelhantes a outros isolados de referência da mesma espécie de outras regiões do Brasil e do mundo.(AU)

Infección por Cyclospora sp. en tres pacientes inmunocompetentes / Cyclospora sp. infection in tree immunocompetent patients

Se presentan tres casos de pacientes inmunocompetentes con síndrome diarreico que consultaron al Instituto Colombiano de Medicina Tropical en Medellín. El único agente patógeno aislado de sus muestras fecales fue cyclospora sp. Una paciente fue tratada con un medicamento antiparasitario experimental, la nitazoxanida, y los otros dos pacientes con trimetropin-sulfametoxazole, todos con buenos resultados. Se presenta un revisión de algunos aspectos de la enfermedad y se recomienda que, en casos de diarrea prolongada, se disponga de un protocolo completo para estudio de parásitos en materia fecal, además de capacitar muy bien al personal de salud que lee los coprológicos para establecer un diagnóstico diferencial entre el grupo de coccidias